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本周焦點 ELISA實驗操作失敗的主要原因
更新時間:2020-05-07   點擊次數:1576次

我們知道,ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢驗中除正常反應外,有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性),那么致使實驗不成功的主要原因有哪些咧?下面我們一起來看看公司為大家推薦的技術,本周焦點:ELISA實驗操作失敗的主要原因。
   
*,標本受細菌污染:因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。

第二,標本的影響:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。   

第三,標本凝固不全:在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

第四,標本保存不當:在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。

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