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選購ELISA試劑盒方法信然有妙招
更新時(shí)間:2014-08-26   點(diǎn)擊次數(shù):1192次

    一直以來,ELISA試劑盒以其敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn),在科研中深受廣大,科研工作者的喜愛.而市面上各種試劑盒,數(shù)不勝數(shù).讓大家都產(chǎn)生了,選擇性綜合癥,也挑不出自已的那個(gè)試劑盒.現(xiàn)在我們公司列出了一下,一些選購的常識(shí),希望能為大家選購時(shí)提代一幫助.

   ELISA試劑盒雖然有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

   如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。

    單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。

    如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來避免上述問題。

    以上是我們就客戶在購買ELISA試劑盒時(shí)咨詢問題,發(fā)表的一點(diǎn)拙見,歡迎大家拍磚指正.

上海通蔚生物科技有限公司

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